ارزیابی مقایسه ای مقایسه ای دورزولاماید بر ساختمان و عملکرد کربنیک انیدراز iiگاوی و انسانی

چکیده کربنیک انیدراز (کربنات هیدرولاز، کربنات دهیدراتاز 4.2.2.1 ec ca,) متالوآنزیمی است که هیدراسیون برگشت پذیر دی اکسید کربن به بی کربنات و پروتون را کاتالیز می کند. این واکنش در عین سادگی اثرات مهمی بر هموستازی و فرایند های فیزیولوژیک بدن دارد. در مطالعه حاضر میان کنش دورزولاماید، به عنوان یک مهارکننده سولفونامیدی قوی، و کربنیک انیدرازii انسانی و گاوی توسط روش های مختلف از جمله اسپکتروسکوپی مرئی- فرابنفش، فلوئورسانس، دورنگ نمایی دورانی (cd) در بافر تریس 50 میلی مولار با 75/7ph مورد بررسی قرار گرفت. طیف فلوئورسانس ذاتی کربنیک انیدراز ii گاوی و انسانی در حضور دورزولاماید نشان می دهد که دارو باعث خاموش کردن شدت فلوئورسانس آنزیم می شود. بررسی پارامترهای ترمودینامیکی اتصال نشان داد که اتصال دورزولاماید به هر دو نوع آنزیم توسط آنتالپی پیش رانده می شود و نیرو های عمده درگیر در اتصال، پیوند های هیدروژنی و میان کنش های واندروالس می باشند. شاخص آبگریزی سطحی پروتئین (psh) با استفاده از 1- آنیلینیو نفتالن – 8 – سولفونیک اسید (ans) نشان داد که psh آنزیم کربنیک انیدراز انسانی در حضور دارو کاهش و در کربنیک انیدراز گاوی افزایش پیدا می کند. نتایج حاصل از نمودار جاب بیانگر این بود که اتصال میان آنزیم های نوع انسانی و گاوی با داروی دورزولاماید با استویکیومتری 1 به 1 اتفاق می افتد. بررسی طیف های cd فرابنفش دور، آنزیم کربنیک انیدراز ii گاوی و انسانی نشان داد که محتوای مارپیچ آلفا در حضور دورزولاماید افزایش یافته، در حالی که طیف cd فرابنفش نزدیک در کربنیک انیدراز ii گاوی اندکی کاهش فشردگی و در نوع انسانی افزایش فشردگی را در ساختمان سوم نشان داد. تیتراسیون آنزیم ها با و کمپلکس های دارو و آنزیم با n- بروموسوکسینیمید (nbs) نشان داد که حضور دارو باعث تغییر در تعداد تریپتوفان های در دسترس حلال می شود. میزان سرعت تجمع حرارتی کربنیک انیدراز ii گاوی در حضور دورزولاماید، کاهش یافت که می تواند بیانگر عملکرد شبه چپرون داروی دورزولاماید باشد. بطورکلی نتایج نشان داد اتصال دورزولاماید به کربنیک انیدراز ii گاوی و انسانی باعث خاموش شدن نشر فلوئورسنس و افزایش محتوی مارپیچ آلفا در ساختمان دوم آن ها می شود. در کربنیک انیدراز ii گاوی القای اندکی افزایش انعطاف در ساختمان سوم و در کربنیک انیدراز ii انسانی کاهش انعطاف مشاهده می گردد. اتصال داروی دورزولاماید به آنزیم نوع انسانی قویتر از نوع گاوی است و میزان تشکیل تجمعات پروتئینی در آنزیم کربنیک انیدراز ii گاوی در حضور دارو کاهش یافت.